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Product Category详细介绍
产物属性:
产物名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA八戒影院 | Chicken N-acetyl-β-D-glucosaminidase, NAG Elisa Kit | 48T/96T | GOY-3152E |
实验原理:
本八戒影院应用双抗体夹心法测定标本中鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平。用纯化的鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),再与HRP标记的鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)浓度。
八戒影院组成
1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品(80pg/ml) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20尘濒/瓶。
4、标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10尘濒/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10尘濒/瓶。
6、标记抗体(Biotin-antibody):1×120μ濒/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μ濒/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10尘濒/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20尘濒/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10尘濒/瓶(2N H2SO4)。
操作步骤
1.标准品的稀释:本八戒影院提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
40pg/ml | 5号标准品 | 150μ濒的原倍标准品加入150μ濒标准品稀释液 |
20pg/ml | 4号标准品 | 150μ濒的5号标准品加入150μ濒标准品稀释液 |
10pg/ml | 3号标准品 | 150μ濒的4号标准品加入150μ濒标准品稀释液 |
5pg/ml | 2号标准品 | 150μ濒的3号标准品加入150μ濒标准品稀释液 |
2.5pg/ml | 1号标准品 | 150μ濒的2号标准品加入150μ濒标准品稀释液 |
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μ濒,待测样品孔中先加样品稀释液40μ濒,然后再加待测样品10μ濒(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μ濒,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μ濒,再加入显色剂B50μ濒,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μ濒,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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