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重组蛋白质生产实验步骤

1.  在悬浮培养液中培养Sf9细胞，并使之适应无血清培养液。

2.  准备旋转培养瓶，用于按比例扩增Sf9细胞，将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂，另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管（约6英寸或15 cm）装在通气孔中，末端连接一滤器，借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。

3.  将一段长管（30~60 cm）连接至进气孔，并在末端连接一滤器，用管索加固，另一段管子连接于滤器的另一端，用管索固牢。管子末端用铝箔封好。

4.  将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开，高压灭菌培养瓶1 h。

5.  将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半满至全满之间，加入足够的无血清培养液以使细胞终密度达到5×105~6×105细胞/ml 至1.5×106细胞/ml。

6.  将培养瓶放在27℃培养箱中的磁力搅拌器上。将搅拌速度设置在80 r/min。从进 气管的末端移去铝箔，并将它连接到供气泵。接通泵的电源，使其流量达到500~700 ml/min。

7.  细胞生长至密度约1.5×106细胞/ml。在层流室中将感染复数（MOI）为1~2的病毒通过侧臂直接加到培养瓶中。 

8.  于27℃将培养瓶置于磁力振荡器上并通气，确定温育培养物的时间。 

9.  处理上清得到分泌蛋白或处理细胞得到胞内蛋白。重组蛋白质生产实验步骤