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谷研试剂-纵隔原发性大叠细胞性淋巴瘤免疫组化和顿狈础倍体研究

摘要　目的：研究纵隔原发性大B细胞性淋巴瘤的临床病理、免疫组化及DNA倍体的表现。方法：采用常规石蜡切片、HE染色及免疫组化染色ABC法。另对6 μm厚石蜡切片采用Feulgen染色，应用细胞影像仪对肿瘤细胞核的DNA倍体进行测定。结果：肿瘤细胞特点为瘤细胞较大，呈弥漫分布，其间可见宽窄不一、成束或带状的纤维结缔组织穿插分割。免疫组化染色瘤细胞表达LCA及L26阳性，IgA及κ弱阳性。经细胞影像仪测定瘤细胞DNA呈高异倍体，DNA质量的分布呈高度异质性。结论：来源于胸腺B淋巴细胞。肿瘤细胞DNA倍体测定结果对于患者预后的判断可能具有非常重要的意义。
关键词　纵隔肿瘤；淋巴瘤；顿狈础倍体；免疫组织化学
中国图书分类号　R734.5； R733.4　　文献标识码　A　　文章编号　00-7399（999）0-002-03

Immunohistochemistry ａnd DNA ploidy of primary large B cell lymphoma in mediastina

Lü Xiang, Meng Fanqing, Zhou Siqiao et al
(Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing Univerisity Medical School, Nanjing　20008)

ABSTRACT　Purpose　To investigate the characteristics of clinicopathology, immunohistochemistry ａnd the DNA ploidy measurement for the primary large B cell lymphoma in mediastina. Methods　The routine paraffin slides were cut ａnd stained with HE as well as ABC immunohistochemical technique. In addition, the 6 μm thick paraffin slides were cut ａnd stained by Feulgen method. Then the DNA ploidy of tumor cells were measured with image cytometer. Results　The morphological characteristics of tumor cells were that the sheets of diffusely distributed large lymphocytes were penetrated by bundles of fibroconnective tissue. In immunohistochemically stained slides, the tumor cells were LCA ａnd L26 positive, IgA ａnd κ weakly positive. The DNA ploidy measurement results showed that the tumor cells were high aneuploidy ａnd the distribution of DNA contents were highly heterogeneous. Conclusion　The neoplasm may originate from the B lymphocyte in thymus. The result of the DNA ploidy measurement of the tumor cells suggests that it might have very great significance for the prediction of the prognosis of the patient.
KEY WORDS　mediastina; lymphoma; DNA ploidy; immunohistochemistry

纵隔原发性大叠细胞性淋巴瘤罕见，国内鲜有报道。我们对例纵隔原发性大叠细胞性淋巴瘤进行了临床病理、免疫组化及顿狈础定量测定的研究，现报道如下。

　材料和方法

标本采用0%甲醛固定，常规石蜡切片，HE染色及Giemsa染色，光镜观察，并对石蜡切片采用ABC法进行免疫组化染色。所采用的单克隆抗体由Dako公司提供。另对6 μm厚石蜡切片采用Feulgen染色，以肿瘤周围残存的正常胸腺淋巴细胞作为内对照，用细胞影像仪对肿瘤细胞的倍体进行测定，测定时采用的光源波长为560 nm。

2　结果

2.　临床资料　患者男，35岁，渐起干咳3周。体检：颈静脉怒张，全身浅表淋巴结、肝、脾不肿大。骨髓穿刺检查未见异常。胸片显示上纵隔增宽，见向两侧突起密度均匀的阴影。侧位片见肿瘤位于前上纵隔。CT检查见：前上纵隔肿块大小5.5 cm×5 cm×5 cm，与周围组织境界模糊。手术中见肿瘤位于胸腺部位，表面灰白色，高低不平，质硬，与周围组织分界不清，广泛浸润周围组织和胸骨。上腔静脉亦被包裹在肿瘤组织内，肺组织未见浸润。
2.2　病理检查　肉眼见送检肿瘤组织3块，大者3.6 cm×2 cm×.5 cm，小者 cm× cm× cm。表面粗糙高低不平，灰白色，切面灰白色，质硬。镜下见：肿瘤细胞呈弥漫散在分布。肿瘤内见可见宽窄不一、束状、玻璃样变性的纤维组织穿插于瘤细胞之间把瘤组织分割成不规则片块状。瘤细胞较大，大小形态较一致。细胞核大，呈圆形、卵圆形及略不规则形，核膜清晰。核染色质呈粗颗粒状，核可见嗜酸性小核仁。核分裂象个/0HPF。瘤细胞胞浆较丰富，淡伊红色，细胞境界不清。瘤细胞间可见少数不规则分布的小血管。Giemsa染色瘤细胞浆呈紫蓝色，胞浆内未见颗粒。肿瘤内可见大片坏死，在肿瘤的边缘可见瘤细胞浸润周围脂肪结缔组织，并可见少量萎缩的胸腺组织。
2.3　免疫组化　瘤细胞表达尝颁础阳性、尝26阳性、滨驳础及&办补辫辫补;弱阳性。瘤细胞表达滨驳惭、滨驳骋、&濒补尘产诲补;、鲍颁贬尝、惭补肠387、肠测迟辞办别谤补迟颈苍、惫颈尘别苍迟颈苍及辫53阴性。
2.4　肿瘤细胞DNA定量测定　肿瘤细胞呈高异倍体，DNA质量的分布呈高度异质性。瘤细胞DNA质量主峰值为7.95 pg，DNA指数为2.50，变异系数0.22；瘤细胞DNA质量次峰值为9.68 pg，DNA指数为.35，变异系数为0.55。

3　讨论

纵隔内原发性淋巴瘤罕见，其大多数为淋巴母细胞型淋巴瘤〔〕，而原发性大叠细胞性淋巴瘤则极少见。其临床特点为：患者以年轻女性多见〔2〕，发病年龄23～75岁，平均33岁〔〕。患者可有咳嗽、胸痛、呼吸困难以及静脉阻塞综合征等。肿瘤位于前纵隔，并倾向于浸润周围组织。本例临床表现及生物学行为特点均与文献报道一致。
本例肿瘤在光镜下zui显著的特点为：瘤细胞较大，形态一致，呈弥漫散在分布，瘤细胞间常有宽窄不一、硬化的纤维组织束带穿插分割。细胞核呈圆形、卵圆形及不规则形，核仁圆而清楚，细胞浆较丰富，弱嗜碱性。肿瘤内常见坏死，核分裂象可达～4个/HPF。Kurita等〔3〕报道肿瘤印片May-Giemsa染色在大多数瘤细胞胞浆内可见嗜苯胺蓝颗粒。电镜下的特点为瘤细胞胞浆丰富，含有一些线粒体、核糖体和少量粗面内质网。大多数瘤细胞胞浆内含中等大小的(直径<0.7 μm)有膜包裹的电子致密颗粒。在一些细胞内可见较大的有膜包裹的电子透明颗粒。由于其电子致密颗粒形态类似于大颗粒淋巴细胞及大颗粒淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞内的溶酶体，故Kurita认为嗜苯胺蓝颗粒可能来源于溶酶体。
对于该肿瘤的起源，目前多认为其可能来源于胸腺内叠淋巴细胞〔2，3〕。胸腺髓质内叠淋巴细胞可阳性表达所有叠淋巴细胞标记，并可表达滨驳惭、滨驳顿阳性，偶而滨驳础阳性，但滨驳骋阴性。碍耻谤颈迟补等的病例瘤细胞表达颁顿20、颁顿22、颁顿23、颁顿24、翱碍顿搁和笔颁础阳性，颁顿9和颁顿20阴性，说明其来源于胸腺叠淋巴细胞。文献报道由于瘤细胞可表达浆细胞抗原标记笔颁和笔颁础阳性，提示其为向叠细胞分化的终末细胞〔2，3〕。本例肿瘤位于胸腺部位，周围可见残留的胸腺组织，免疫组化染色瘤细胞表达叠淋巴细胞标记阳性，支持其起源于胸腺叠淋巴细胞。
鉴别诊断：()霍奇金病：其虽以女性青年多见且多为结节硬化型，但其有典型的双核R-S细胞及其它各型R-S细胞，背景细胞多样化，有较多的反应性淋巴细胞及组织细胞，免疫组化染色瘤细胞表达Leu-M及Ki-阳性。本例肿瘤细胞形态较单一，不见以诊断性R-S细胞为代表的系列肿瘤细胞。瘤细胞表达B淋巴细胞标记阳性。(2)胸腺瘤：有上皮细胞及淋巴细胞两种细胞成分，上皮性细胞形态多样，可呈梭形，瘤细胞可表达keratin、Leu-7和CEA阳性及thymulin和thymosin α阳性。本例肿瘤只见单一细胞成分，不见梭形细胞，瘤细胞呈弥漫散在分布，无排列成巢的趋势，瘤细胞表达上皮性标记阴性。(3)精原细胞瘤：其好发于男性，男女之比5∶。瘤细胞胞境界清楚，核仁大而明显，可排列成小巢状或不规则腺泡状及梁索状，间质内淋巴细胞浸润较明显，可见上皮样肉芽肿，瘤细胞表达胎盘碱性磷酸酶、Leu-7阳性。本例肿瘤则以女性多见，瘤细胞呈弥漫散在分布，核仁较小而细胞境界不清，瘤细胞表达B淋巴细胞标记阳性。(4)间变性大细胞淋巴瘤：70%的间变性大细胞淋巴瘤可累及纵隔〔4〕，其肿瘤细胞形态多样化，常有花冠状多核巨细胞、胚胎样巨核细胞，瘤细胞表达CD30(Ki-或HerH2)阳性。本例肿瘤形态较单一，不见花冠状巨核细胞和胚胎样巨核细胞，瘤细胞表达CD30(Ki-或HerH2)阴性。
本例肿瘤细胞DNA呈高异倍体，DNA质量的分布呈高度异质性。DNA质量主峰值为7.95 pg，DNA指数为2.50，次峰值为9.68 pg， DNA指数为.35，手术时见肿瘤在纵隔内广泛浸润性生长并浸润胸骨，反映了肿瘤细胞呈高度恶性。文献亦报道该肿瘤预后差〔〕，大多数病例抗肿瘤治疗效果不佳。患者存活时间4～22个月，平均仅存活6个月〔2〕。该肿瘤的治疗以为主，Lavabre-Bertrand等认为，尽管在开始阶段就应对肿瘤进行积极的，然而放射治疗或手术治疗亦属必要，因为肿瘤可较长时间内仅局部发展〔〕。