八戒影院

谷研试剂-人,3-βD葡葡糖苷酶(,3-βD-Glu)酶联免疫分析  八戒影院使用说明书

本八戒影院仅供研究使用。

  96T

使用目的：

本八戒影院用于测定人血清、血浆及相关液体样本中           ,3-βD   葡葡糖苷酶(,3-βD-Glu)

表达。

实验原理

本八戒影院应用双抗体夹心法测定标本中人 ,3βD 葡葡糖苷酶(,3βDGlu)表达。用纯化的

人 ,3βD 葡葡糖苷酶(,3βDGlu)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中 ,3-βD

葡葡糖苷酶(,3-βD-Glu)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的

,3-βD   葡葡糖苷酶(,3-βD-Glu)抗体结合，形成抗体 抗原 酶标抗体复合物，经过*洗

涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终

的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定

标本中人 ,3-βD 葡葡糖苷酶(,3-βD-Glu)的存在与否。

八戒影院组成

    30 倍浓缩洗涤液

2     酶标试剂

3     酶标包被板

4     样品稀释液

5     显色剂 A 液

6     显色剂 B 液

标本要求

20ml× 瓶

6ml× 瓶

2 孔×8 条

6ml× 瓶

6ml× 瓶

6尘濒&迟颈尘别蝉;/瓶

7      终止液

8      阳性对照

9      阴性对照

0     说明书

    封板膜

2     密封袋

6ml× 瓶

0.5ml× 瓶

0.5ml× 瓶

份

2 张

个

．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

.      编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.      加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照            50%l。然后在待测样品孔先

加样品稀释液                                        40%l，然后再加待测样品    0%l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.    温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.    配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干.

6.    加酶：每孔加入酶标试剂 50%l，空白孔除外。

7.    温育：操作同 3。

8.    洗涤：操作同 5。

9.    显色：每孔先加入显色剂 A50%l，再加入显色剂 B50%l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

5 分钟.

0.   终止：每孔加终止液 50%l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

.   测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。     测定应在加终止

液后 5 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥.00;  阴性对照平均值≤0.0

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.5

阴性判定：样品 OD 值<  临界值（CUT  OFF）者为 ,3-βD 葡葡糖苷酶(,3-βD-Glu)

阴性

阳性判定：样品 OD 值≥  临界值（CUT  OFF）者为 ,3-βD 葡葡糖苷酶(,3-βD-Glu)

阳性

。

注意事项

．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．八戒影院从冷藏环境中取出应在室温平衡 530 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须

注意安全。

保存条件及有效期

．八戒影院保存：；28℃。

2．有效期：6 个月