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小鼠骨成型蛋白受体A 贰尝滨厂础八戒影院 使用说明书
本八戒影院仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!
检测范围:每种的检测范围都有所不同,具体请查看说明书
特异性:本八戒影院可同时检测天然或重组的指标,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:贰尝滨厂础法检测指标血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中含量或灵敏度。
小鼠骨成型蛋白受体A 贰尝滨厂础八戒影院 操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合八戒影院的检测范围。
. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液00μl,余孔分别加标准品或待测样品00μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应20分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加标记抗体工作液 00μl(取μl标记抗体加99μl标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡-2分钟,200μl/每孔,甩干。 产物名中文(英文)酶联免疫吸附测定八戒影院
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同标记抗体工作液) 00μl,37℃,60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡-2分钟,200μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后5分钟以内进行检测。
本品用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗HVA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、化的抗HVA抗体、HRP标记的亲和素,经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的HVA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)2. 微量加液器及吸头,EP管3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸
标记抗体的稀释原则:
临用前以标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔00&尘耻;濒),实际配制时应多配制0.-0.2尘濒。如0&尘耻;濒标记抗体加990&尘耻;濒标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔00μl),实际配制时应多配制0.-0.2ml。如0μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 . 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2. 标准品(Standard):2瓶。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):×20ml/瓶。
4. 标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):×0ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):×0ml/瓶。
6. 标记抗体(Biotin-antibody):×20μl/瓶(:00)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):×20μl/瓶(:00)
8. 底物溶液(TMB Substrate):×0ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
0. 终止液(Stop Solution):×0ml/瓶(2N H2SO4)。
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