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操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合八戒影院的小鼠睾酮 ISA八戒影院 检测范围。&苍产蝉辫;
. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液00μl，余孔分别加标准品或待测样品00μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应20分钟。&苍产蝉辫;
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。&苍产蝉辫;
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加标记抗体工作液&苍产蝉辫;00μl（取μl标记抗体加99μl标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。&苍产蝉辫;
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡-2分钟，200μl/每孔，甩干。&苍产蝉辫;
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同标记抗体工作液）&苍产蝉辫;00μl，37℃，60分钟。&苍产蝉辫;
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡-2分钟，200μl/每孔，甩干。&苍产蝉辫;
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔显色不明显，即可终止）。&苍产蝉辫;
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。&苍产蝉辫;
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。&苍产蝉辫;在加终止液后5分钟以内进行检测。&苍产蝉辫;
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