γ谷氨酰半胱氨酸连接酶(骋颁尝)测试盒可见分光光度法
分光光度法 50 管/48 样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
GCL 是 GSH 合成的限速酶,GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL 基因表达受多种因素
调节,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL 活性高低对 GSH 含量和 GSH/GSSG
比值有重要影响。
测定原理:
在 ATP 和 Mg2+存在下,GCL 催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸;同时 ATP 去磷
酸化产生无机磷分子,通过测定无机磷增加速率,即可计算出 GCL 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 70尘尝×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 14mL 蒸馏水充分震荡溶解。
试剂叁:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入蒸馏水 3.5 mL 充分震荡溶解。
试剂四:液体 16尘尝×1 瓶,室温保存。
试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 30mL 蒸馏水,充分震荡溶解后,缓缓加入 1.0 mL
浓硫酸(自备),边加边搅拌