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小鼠真皮微血管内皮细胞

简要描述：产物可保小鼠真皮微血管内皮细胞的生长状态。本产物中已包含小鼠真皮微血管内皮细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于小鼠真皮微血管内皮细胞的体外培养。本产物仅供进一步科研使用，不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产物型号：GOY-01X1279
厂商性质：科研
更新时间：2023-10-24 00:00:00
访&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;问&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;量：248

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?原代细胞培养实验注意事项详解

详细介绍

小鼠真皮微血管内皮细胞

产物名称：小鼠真皮微血管内皮细胞

货号：GOY-01X1279

分类：原代细胞

2.组织来源：皮肤组织

3.产物规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞介绍：小鼠真皮微血管内皮细胞分离自真皮组织；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。微血管内皮细胞（MEC）在炎症反应、肿瘤生长、创面愈合过程中起着非常重要的作用。在创面愈合研究领域，由于表皮细胞、真皮成纤维细胞体外培养技术的成熟，人们对这两种细胞早已进行了大量深入的研究。与之相比，对参与创面愈合过程的另一种主要细胞——真皮微血管内皮细胞，则因其体外分离培养技术的困难而使相关的研究受限。

5.方法介绍：公司实验室分离的小鼠真皮微血管内皮细胞采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：公司实验室分离的小鼠真皮微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等换液频率每2-3天换液一次生长特性贴壁细胞形态内皮细胞样传代特性可传2-3代培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

培养操作：

小鼠真皮微血管内皮细胞1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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