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大鼠腮腺细胞

简要描述：产物可保大鼠腮腺细胞的生长状态。本产物中已包含大鼠腮腺细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于大鼠腮腺细胞的体外培养。本产物仅供进一步科研使用，不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产物型号：GOY-01X0763
厂商性质：科研
更新时间：2023-10-24 00:00:00
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?原代细胞培养实验注意事项详解

详细介绍

大鼠腮腺细胞

产物名称：大鼠腮腺细胞

货号：GOY-01X0763

分类：原代细胞

2.组织来源：腮腺组织

3.产物规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞介绍：大鼠腮腺细胞分离自腮腺组织；腮腺是哺乳类动物口腔中位于下颌角处的大唾液腺，位于外耳道的前下方，下颌后窝内及下颌支的深面。腮腺也是某些无尾目动物颈部有毒皮肤腺的聚集体；唾液腺有3对，腮腺、舌下腺和颌下腺，其中大的一对是腮腺。腮腺细胞是高度分化的上皮源性细胞，是一种营养需要复杂、在一般合成培养基中不易生长，体外培养比较困难。目前，DMEM培养液被认为较适于腺细胞的培养。加入一定量的血清更有利于细胞的生长、增殖与分化。另外，接种的细胞密度也是培养成功的关键因素之一，尤其是在腺细胞这种单层细胞培养时，接种的细胞总数量和生长基质表面的细胞密度对整个细胞的生长均有影响。

5.方法介绍：公司实验室分离的大鼠腮腺细胞采用胶原酶-联合消化后差速贴壁，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：公司实验室分离的大鼠腮腺细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等换液频率每2-3天换液一次生长特性贴壁细胞形态梭形、多角形传代特性可传1-2代培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

培养操作：

大鼠腮腺细胞1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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