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产物名称:兔肌源性干细胞
货号:GOY-01X0760
分类:原代细胞
2.组织来源:骨骼肌组织
3.产物规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
4.细胞介绍:兔肌源性干细胞分离自肌肉组织;肌源性干细胞(MDSCs)属于成体多能干细胞,具有多细胞系分化和自我更新能力。通过诱导刺激,MDSCs可以分化为脂肪、骨骼、软骨、平滑肌和神经细胞等多种细胞和组织类型;作为基因治疗和组织工程的供体细胞,已成为治疗心肌梗死、Duchenne氏肌营养不良等疾病的研究热点;近年来,肌源性干细胞在治疗尿失禁等方面的应用逐步得到重视。需注意的是,肌源性干细胞主要存在于骨骼肌组织中,只是成熟组织的很少部分细胞;平时处于静止状态,在细胞应激和组织缺失时才会激活;并且随着年龄的增加,所含细胞数量逐渐减少,而目前临床疾病的治疗主要是针对成体进行。肌源性干细胞的体外扩增对细胞移植和干细胞介导的基因治疗至关重要。对肌源性干细胞的扩增研究发现,EGF、FGF-2和SCF可以通过减数分裂或促使不分裂细胞进入有丝分裂周期,从而刺激细胞增生。更重要的是,细胞因子诱导的体外扩增可以通过自我更新不刺激细胞分化,从而保持干细胞表型。
5.方法介绍:公司实验室分离的兔肌源性干细胞采用胶原酶--联合消化法结合密度梯度离心、差速贴壁法,后通过肌源性干细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
6.质量检测:公司实验室分离的兔肌源性干细胞经Sca-1免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
7.培养信息:包被条件 PLL(0.1mg/ml) 培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传5代左右;3代以内状态 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
培养操作:
兔肌源性干细胞1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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