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兔骺软骨细胞

简要描述：产物可保兔骺软骨细胞的生长状态。本产物中已包含兔骺软骨细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于兔骺软骨细胞的体外培养。本产物仅供进一步科研使用，不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产物型号：GOY-01X0752
厂商性质：科研
更新时间：2023-10-24 00:00:00
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?原代细胞培养实验注意事项详解

详细介绍

兔骺软骨细胞

产物名称：兔骺软骨细胞

货号：GOY-01X0752

分类：原代细胞

2.组织来源：生长板组织

3.产物规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞介绍：兔骺软骨细胞分离自骨骺生长板；骨骺生长板位于长骨两端骨骺和骨干之间的软骨组织，其中的骺软骨细胞可分裂、成熟、肥大，最终被骨组织所替换，对于长骨生长具有重要作用。幼稚的骺软骨细胞位于软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与软骨表面平行，越向深层的骺软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形，染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的骺软骨细胞多2-8个成群分布于软骨陷窝内，这些骺软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，骺软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，骺软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的骺软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

5.方法介绍：公司实验室分离的兔骺软骨细胞采用胶原酶-联合消化并软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：公司实验室分离的兔骺软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等换液频率每3-4天换液一次生长特性贴壁细胞形态梭形、多角形传代特性可传5代左右；3代以内状态培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

培养操作：

兔骺软骨细胞1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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