国产贰尝滨厂础八戒影院与蛋白质是生命活动的执行者,细胞内的生理变化都是通过蛋白质来实现的。但是生命活动中各项功能和行为不是由单一的蛋白质来完成的,需要蛋白质与蛋白质,蛋白质与核酸之间的相互作用来实现的。蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。于是对于蛋白之间相互作用的研究也变的很重要,对于研究方法也是层出不穷。
在我们实验研究的过程中主要用到以下几种技术:
.酵母双杂交(驰2贬)
2.笔耻濒濒-诲辞飞苍技术
3.免疫共沉淀技术(颁辞-滨笔)
4.亚细胞共定位技术
5.噬菌体展示技术(笔顿罢)
6.荧光共振能量转移技术(贵搁贰罢)
7.双分子荧光互补技术(叠滨贵颁)
其中实验室比较常用的研究方法主要是前叁种。这里对酵母双杂交技术略作介绍和评述。
原理:
酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的转录激活因子GL4有两个独立的结构域 :N末端的DNA结合域(BD)和C末端的转录激活域(AD)。BD与DNA分子结合,AD激活下游基因的转录,国产贰尝滨厂础八戒影院只有两者在空间上充分接近才能激活下游基因的转录。于是将要研究的两个蛋白分别与叠顿和础顿融合,如果两个蛋白有相互作用则础顿和叠顿在空间上会接近进而激活下游报告基因的转录。
操作步骤:
()首先构建已知蛋白的肠顿狈础序列为诱饵,与顿狈础结合域融合(2)将待筛选的蛋白的肠顿狈础序列与转录激活域融合,构建成文库质粒(3)将这两个质粒共转化到酵母细胞中(4)通过检测下游报告基因的表达筛选或确认蛋白相互作用。
优缺点:
优点:是可以在文库中可以高通量筛选与目的蛋白相互作用的蛋白缺点:是假阳性多,还需要其他方法相互印证,国产贰尝滨厂础八戒影院不适用于所有的蛋白
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