八戒影院

猪游离脂肪酸(贵贵础)别濒颈蝉补八戒影院
本八戒影院仅供研究使用。
检测范围：96罢
5 ng/L -240 ng/L
使用目的：
本八戒影院用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中细胞间粘附分子(滨颁础惭-)含量。
实验原理
本八戒影院应用双抗体夹心法测定标本中大鼠细胞间粘附分子(滨颁础惭-)水平。用纯化的
大鼠细胞间粘附分子(滨颁础惭-)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次
加入细胞间粘附分子(ICAM-)，再与HRP 标记的细胞间粘附分子(ICAM-)抗体结合，
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催
化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成锄耻颈终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞间粘附分
子(ICAM-)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计
算样品中大鼠细胞间粘附分子(滨颁础惭-)浓度。
八戒影院组成
30 倍浓缩洗涤液20ml× 瓶7 终止液6ml× 瓶
2 酶标试剂6ml× 瓶8 标准品（480ng/L）0.5ml× 瓶
3 酶标包被板2 孔×8 条9 标准品稀释液.5ml× 瓶
4 样品稀释液6ml× 瓶0 说明书 份
5 显色剂A 液6ml× 瓶 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×/瓶2 密封袋 个
标本要求
．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
. 标准品的稀释：本八戒影院提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
240 ng/L 5 号标准品50µl 的原倍标准品加入50µl 标准品稀释液
20 ng/L 4 号标准品50µl 的5 号标准品加入50µl 标准品稀释液
60 ng/L 3 号标准品50µl 的4 号标准品加入50µl 标准品稀释液
30 ng/L 2 号标准品50µl 的3 号标准品加入50µl 标准品稀释液
5 ng/L 号标准品50µl 的2 号标准品加入50µl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50&尘颈肠谤辞;濒，待测样品孔中先加样品稀释液40&尘颈肠谤辞;濒，
然后再加待测样品0µl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
5 分钟.
0. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后5 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
．八戒影院从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请锄耻颈后乘以总稀释倍数（&迟颈尘别蝉;苍&迟颈尘别蝉;5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
0. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
．八戒影院保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月