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鳕鱼源性成分探针法荧光定量笔颁搁八戒影院荧光定量笔颁搁实验步骤

发布时间:2022-11-15&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;点击次数:472

荧光定量笔颁搁实验步骤:

①产物仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体5秒后,5到30℃孵育2到3分钟。4℃下2000rpm离心5分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后5到30℃孵育0分钟后,于4℃下2000rpm 离心0分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-0分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 )紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(:00)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

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