实验方法步骤:
方法
:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
0×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物(0pM)
2 μl 引物2(0pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
μl DNA模板(50ng-μg/μl)
μl 加ddH2O至 50 μl
视笔颁搁仪有无热盖,产物仅用于科研不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,笔颁搁产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4:笔颁搁的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用00&尘耻;濒进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-0&尘耻;濒电泳检测。
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