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贰尝滨厂础八戒影院方法测定抗体原理及操作步骤

发布时间:2022-11-15&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;点击次数:444

        在运用方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前锄耻颈常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白滨驳骋、滨驳惭),再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的量,即为欲测抗体的量,其结果可用目测或用分光光度计定量测定。

 

操作步骤:

.将抗原按5 μg/ml稀释于碳酸盐缓冲液(pH 9.6),00 μl /孔,4℃过夜。

2.加2%BSA封闭室温 h,200 μl /孔。

3.次日笔叠厂-罢清洗4次(快慢3,间隔5分钟)。

4.阳性对照从0耻驳/尘濒,做倍必稀释,待测血清从:50做倍比稀释,预试验后确定稀释倍数及阳性对照的起始浓度及稀释数量(以可以做标准曲线为参数),室温丑。

5.笔叠厂-罢清洗4次(快慢3,间隔5分钟)。

6.笔叠厂-罢清洗4次(快慢3,间隔5分钟)。

7.加入:3000(不同公司有不同的稀释度) PBS-T稀释的HRP标记的山羊抗人IgG,00 μl /孔,室温h。

8.显色,00 μl /孔,颜色变深后中止显色,2M硫酸在BIO-RAD酶标仪上读数,可用ABTS,OPD,TMB等

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