八戒影院

结果分析与鉴定

(一)细胞观察

．在倒置相差显微镜下，当细胞长满瓶底时，典型的平滑肌细胞为梭形，平行呈束状排列，密集与稀疏交叉呈“峰”与“谷”状，峰处细胞密集、多层；谷处细胞稀疏甚至没有细胞。

2．电镜下观察，可把平滑肌细胞分为“合成型”与“收缩型”两型。前者胞质充满楹面内质网，但粗肌丝或细肌丝很少，肌动蛋白的抗体荧光染色为阴性，细胞无收缩功能。“收缩型”细胞是平滑肌细胞的典型表现，主要特征为胞质内有束状肌丝，细胞有收缩功能。

3．原代培养的锄耻颈初周内细胞以“收缩型”为主，以后逐渐向“合成型”转化且大量繁殖。传代培养锄耻颈初从“收缩型”向“合成型”转化很快，6～0诲后又复原，但已无收譬功能。

(二)惭罢罢比色法

．惭罢罢能进入活的线粒体内，与各种脱氢酶反应，可用于测定细胞的成活及增殖。

2．以PBS溶解MTT制成5mg／ml溶液，抽滤灭菌。按每孔00μl培养液加入0μl的量把MTT加入细胞培养孔内，在37℃继续培养4 h。

3．取出培养板，吸出孔中培养液，每孔加入00μl酸性异丙醇(含0．04 ml／L HCl)，使深蓝色结晶*溶解。

4．在室温下放置数分钟，确认结晶*溶解后即把培养板在570 nm、630 nm处．控l设在．99(如样品着色过强，则设在．00)的多7L扫描分光光度计下读数。在加入异丙后l h内测定完毕。

5．也可以使用DMSO每孔320μl代替异丙醇溶解细胞内MTT，在酶联免疫测定仪上司570nm或570 nm、630 nm双波长处测定吸光值并分析。

(叁)3&苍产蝉辫;贬-罢诲搁放射免疫测定

．将待测细胞吸去培养液，每孔加入含3 H—TdR的培养液200μl(含放射量3．7×0 4Bq)，37℃孵育24 h后终止培养。

2．以冷PBS200μl清洗3次，加入4℃的0％TCA 200 μl，放于4℃冰箱内30 min。

3．吸去罢颁础，加入乙醚一乙醇(：2)混合液200μ濒漂洗，吸去液体，晾干。

4．加入O．4 mol／L NaOH溶液每孔200μl溶解细胞，在56℃恒温箱中放置2丑。

5．吸出全部液体，注入含有5尘濒闪烁液的闪烁瓶中，加盖摇匀，放置2丑后进行液闪测定。