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显色

取出厂顿厂-聚丙烯酰胺凝胶，经超纯水清洗2次，每次分钟，4块胶分别按4种不同的染色方法显色。下列每步操作皆在摇床上进行。4种染色法成份组成及操作如下：贰尝滨厂础八戒影院

①传统考马斯亮蓝染色法：清洗后的凝胶经固定液(45.4%甲醇、4.6%乙酸)固定小时，随后用染色液(45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.% CBB G250)着色过夜，再经洗脱液(5%甲醇、7.5%乙酸)过夜脱色至背景清晰。

②胶体考马斯亮蓝染色法(colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB)染色法：凝胶先经超纯水漂洗后，再用colloidal Coomassie blue G250染色液(.6%磷酸、8%硫酸铵、0.02% CBB G250、20%乙醇)着色过夜，洗脱液为超纯水，换液3～4次直至背景清晰。贰尝滨厂础八戒影院

③改良考马斯亮蓝染色法(modified Coomassie brilliant blue，mCBB)染色法[6];操作方法同胶体考马斯亮蓝染色法，只是染色液组成不同(0.2% CBB G250、0%硫酸铵、0%磷酸、20%乙醇)，着色小时即可。

④银染(silver staining)：凝胶漂洗后先被固定液(50%甲醇+ 5%乙酸)固定小时，随后分别用50%甲醇和超纯水清洗各0分钟，0.02 mg/L Na2S2O3 致敏分钟，超纯水清洗2次，每次分钟，再用预冷的0.5% AgNO3着色20分钟，超纯水再次清洗2次，每次分钟，2% Na2CO3 + 0.04% 甲醛显色20～30秒，当溶液变黄以后除去，换新鲜的溶液后继续显色直至显色适度后，以5%乙酸终止显色。

操作的安全性与简便性

由于有机溶剂的相似作用，我们在改进的考马斯亮蓝染色法里，抛弃有毒的甲醇及气味难闻的乙酸，同时在步骤上，我们采用染色和固定一步法进行，减少了*步固定的时间，仅用超纯水清洗，缩短了整个染色及人与有毒物接触的时间。结果显示，两种考马斯亮蓝染色法获得的图像背景不比传统考马斯亮蓝染色法差。

通过我们的摸索及比较分析认为，用低毒的乙醇替代甲醇，采用高酸、高离子、快速而简便的改良考马斯亮蓝染色法能获得低背景、高灵敏度、兼容质谱的蛋白质显示，能为蛋白质组研究、双向凝胶电泳技术的蛋白质分析提供质量的保证。贰尝滨厂础八戒影院

综上比较，作为蛋白质染色的方法，考马斯亮蓝法操作便捷、兼容性高，但耗时较长。经改良的考马斯亮蓝法的检测灵敏性大大提高，甚至不输银染法。而银染法虽然耗时短，但步骤较多，且兼容性低。