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苏木素复染时间的把握？
 
.苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。抗体
 
2.盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（动作一定要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。
 
3.如果分化的颜色过浅，可以复置于苏木素中染色。
 
PBS 的清洗方式选择、次数和时间的选择？
 
.单独冲洗，防止交叉反应造成污染。
 
临床上每天检测的病例很多，所用的抗体种类及项目也多，如果在加入一抗孵育完后，将它们在一个缸内洗，这样就会造成交叉污染，影响zui后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗，冲洗的 PBS 为一次性，保证切片没有相互交叉污染的机会。
 
2.温柔冲洗，防止切片的脱落。
 
冲洗切片，取出切片，将 PBS 从上轻轻地冲洗，让 PBS 自上而下流下来，不要拿起切片将 PBS 对准切片冲洗，这样由于冲出的 PBS 有一定的冲击力，很容易使切片周边引起松动，导致切片的脱落。
 
3.冲洗的时间要足够，才能*洗去结合的物质。
 
冲洗切片有人提出用微振荡器振染，振下未结合的各种物，使之不产生背景，此种做法一是浪费时间，二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为，用一小烧杯柔和地于切片上冲洗，就能*冲洗去未结合的物质，无需附加其它条件，冲洗好于切片上再注入 PBS，持续 2 min 左右就*足够了。
 
4.PBS 的 pH 和离子强度的使用和要求。
 
刘彦仿指出：中性及弱硷性条件（pH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解。我们目前常用的 PBS 的 pH 在 7.4-7.6 ，浓度是 0.0 M，根据本室十几年来的使用情况，认为该溶液价格便宜配制方面，使用效果好。
 
5.常用试剂的配制和使用。
 
在免疫组织化学的染色过程中，用得锄耻颈多的试剂就是缓冲液，因为切片在整个染色中，抗体的加、换、切片的冲洗，DAB 的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用，缓冲液的过酸或偏碱，都将影响染色的结果。