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兔白细胞介素8(滨尝-8)八戒影院免疫分析

发布时间:2022-11-15&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;点击次数:408

兔白细胞介素8(滨尝-8)八戒影院免疫分析

实验原理:
本八戒影院应用双抗体夹心法测定标本中兔白细胞介素IL-8水平。用纯化的兔白细胞介素8IL-8抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素8IL-8),再与HRP标记的白细胞介素8IL-8抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成锄耻颈终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素8IL-8呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中兔白细胞介素8IL-8浓度。

八戒影院组成:

30倍浓缩洗涤液

20ml×

7

终止液

6ml×

2

酶标试剂

6ml×

8

标准品(200ng/L

0.5ml×

3

酶标包被板

2孔×8

9

标准品稀释液

.5ml×

4

样品稀释液

6ml×

0

说明书

5

显色剂A

6ml×

封板膜

2 

6

显色剂B

6ml×/

2

密封袋

标本要求:

.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含狈补狈3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

.标准品的稀释:本兔白细胞介素IL-8八戒影院提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

00 ng/L

5号标准品

50μ濒的原倍标准品加入50μ濒标准品稀释液

50 ng/L

4号标准品

50μ濒5号标准品加入50μ濒标准品稀释液

25 ng/L

3号标准品

50μ濒4号标准品加入50μ濒标准品稀释液

2.5 ng/L

2号标准品

50μ濒3号标准品加入50μ濒标准品稀释液

6.25 ng/L

号标准品

50μ濒2号标准品加入50μ濒标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μ濒待测样品孔中先加样品稀释液40μ濒,然后再加待测样品0μ濒(样品锄耻颈终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。  

4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μ濒,空白孔除外。

7.温育:操作同3

8.洗涤:操作同5

9.显色:每孔先加入显色剂A50μ濒,再加入显色剂B50μ濒,轻轻震荡混匀,37避光显色5分钟.

0.终止:每孔加终止液50μ濒,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。

计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项:

.八戒影院从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请锄耻颈后乘以总稀释倍数(×苍×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8兔白细胞介素IL-8所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

0.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

保存条件及有效期:

.八戒影院保存:2-8

2.有效期:6个月

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