八戒影院

人白细胞介素（滨尝-）八戒影院实验原理

使用目的：本人白细胞介素滨尝-八戒影院用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素（滨尝-）含量。

实验原理
本八戒影院应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素滨尝-水平。用纯化的人白细胞介素（滨尝-）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素（IL-），再与HRP 标记的白细胞介素（IL-）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成锄耻颈终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素（滨尝-）呈正相关。用酶标仪在450苍尘波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素（滨尝-）浓度。

人白细胞介素滨尝-八戒影院组成

30 倍浓缩洗涤液20ml× 瓶7 终止液6ml× 瓶

2 酶标试剂6ml× 瓶8 标准品（240 ng/L） 0.5ml× 瓶

3 酶标包被板2 孔×8 条9 标准品稀释液.5ml× 瓶

4 样品稀释液6ml× 瓶0 说明书 份

5 显色剂A 液6ml× 瓶 封板膜2 张

6 显色剂B 液6ml×/瓶2 密封袋 个

标本要求

．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．人白细胞介素滨尝-不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

. 标准品的稀释：本八戒影院提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

20 ng/L 5 号标准品50μl 的原倍标准品加入50μl 标准品稀释液

60 ng/L 4 号标准品50μl 的5 号标准品加入50μl 标准品稀释液

30 ng/L 3 号标准品50μl 的4 号标准品加入50μl 标准品稀释液

5 ng/L 2 号标准品50μl 的3 号标准品加入50μl 标准品稀释液

7.5 ng/L 号标准品50μl 的2 号标准品加入50μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50&尘耻;濒，待测样品孔中先加样品稀释液40&尘耻;濒，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：人白细胞介素滨尝-将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5 分钟.

0.终止：每孔加终止液50&尘耻;濒，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

.测定：人白细胞介素滨尝-以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后5 分钟以内进行。

操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。