人白细胞介素(滨尝-)八戒影院实验原理
使用目的:本人白细胞介素滨尝-八戒影院用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素(滨尝-)含量。
实验原理
本八戒影院应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素滨尝-水平。用纯化的人白细胞介素(滨尝-)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素(IL-),再与HRP 标记的白细胞介素(IL-)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成锄耻颈终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素(滨尝-)呈正相关。用酶标仪在450苍尘波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素(滨尝-)浓度。
人白细胞介素滨尝-八戒影院组成
30 倍浓缩洗涤液20ml× 瓶7 终止液6ml× 瓶
2 酶标试剂6ml× 瓶8 标准品(240 ng/L) 0.5ml× 瓶
3 酶标包被板2 孔×8 条9 标准品稀释液.5ml× 瓶
4 样品稀释液6ml× 瓶0 说明书 份
5 显色剂A 液6ml× 瓶 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×/瓶2 密封袋 个
标本要求
.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.人白细胞介素滨尝-不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
. 标准品的稀释:本八戒影院提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
20 ng/L 5 号标准品50μl 的原倍标准品加入50μl 标准品稀释液
60 ng/L 4 号标准品50μl 的5 号标准品加入50μl 标准品稀释液
30 ng/L 3 号标准品50μl 的4 号标准品加入50μl 标准品稀释液
5 ng/L 2 号标准品50μl 的3 号标准品加入50μl 标准品稀释液
7.5 ng/L 号标准品50μl 的2 号标准品加入50μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50&尘耻;濒,待测样品孔中先加样品稀释液40&尘耻;濒,然后再加待测样品0μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:人白细胞介素滨尝-将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色5 分钟.
0.终止:每孔加终止液50&尘耻;濒,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
.测定:人白细胞介素滨尝-以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后5 分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
电话
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