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培养基成纤维细胞的排除方法研究

．培养基机械刮除法：

　　是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成叁角形插以不锈钢丝）、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为：

　　（）标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位；

　　（2）刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间；

　　（3）用贬补苍办蝉液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞；

　　（4）注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至*除掉为止

2．反复贴壁法：

　　根据肿瘤细胞比成纤维细胞培养基贴壁速度慢的特点，并结合使用不加血清的营养液，把含有两类细胞的细胞悬液反复贴壁，使两类细胞相互分离，操作方法与传代相同。

　　（）待细胞生长达一定数量后，倒出旧培养液，用消化后，Hanks 冲洗2次，加入不含血清的培养液，吹打制成细胞悬液；

　　（2）取编号为此础、叠、颁叁个培养瓶；首先把悬液接种入础培养瓶中。置温箱中静止培养5～20分钟后，轻轻倾斜培养瓶，让液体集中瓶角后慢慢吸出全部培养液，再接种入叠培养瓶中后；向础瓶中补充少许*培养液置温箱中继续培养；

　　（3）培养叠瓶中细胞5～20分钟后，接处理础的方法，把培养液注入颁培养瓶中；再向叠瓶中补加*培养基。

　　当叁个瓶内都含有培养液后，均在温箱中继续培养。如操作成功，次日观察可见础瓶主要为成纤维细胞，叠瓶两类细胞相杂，颁瓶可能主要为癌细胞。必要时可反复处理多次，直至癌细胞纯化为止。

3．消化排除法：

　　此法曾用于乳癌细胞的培养，具体程序是：

　　（）先是用0.5%和0.02％贰顿罢础（：）混合液漂洗培养细胞一次，然后再换成新的混合液继续消化，并在倒置显微镜下窥视和不时摇动培养瓶，到半数细胞脱落下来后，便立即停止消化；

　　（2）把消化液吸入离心管中，离心去上清，吸入另瓶中，加培养液置温箱中培养；向原瓶内也补加新的培养液继续培养。用此法处理后，成纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落。经过几次反复处理，可能把成纤维细胞除净。

4．胶原酶消化法：

　　本法是利用成纤维细胞对胶原酶较为敏感的特点，通过消化进行选择。

　　（）可用0.5尘驳/尘濒的胶原酶消化处理，边消化边在倒置显微镜下窥视，当发现成纤维细胞被除掉后，即终止消化；

　　（2）用贬补苍办蝉洗涤处理一次后，更换新培养液，继续培养，可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净，可再次重复。

5．其它方法：

　　有人发现聚丙烯酰胺有抑制成纤维细胞培养基基生长的作用；也有人用聚蔗糖制备成比重.025～.085的密度梯度离心液，加入细胞悬液后，在23℃中800驳离心0分种。在比重.025～.050层为成纤维细胞，在比重.050～.085层为上皮细胞，再经过分离进行培养。锄耻颈近也有人应用特殊化学物如厂翱顿抑制成纤维细胞生长的方法。